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Examinando Microbiología por Materia "ADN - ANALISIS"
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Ítem Análisis de la utilidad de los marcadores moleculares 18S, ITS-1, ITS-2, cox1, 12S y 16S en las familias Ascarididae, Onchocercidae y Ancylostomatidae(2023) Mejías Alpízar, María José; Rojas Araya, Ana AliciaLos helmintos son parásitos que pueden producir severos efectos en la salud de humanos y animales, además de altas pérdidas económicas en animales de producción. Costa Rica no está exento de las helmintiasis, ya se ha encontrado entre un 20% y 40% de prevalencia en zonas vulnerables socioeconómicamente. Los métodos tradicionales de diagnóstico de estos parásitos se basan en características morfológicas y el hallazgo de estas formas parasitarias en exámenes microscópicos. Sin embargo, en la actualidad se han implementado métodos moleculares para la detección e identificación de estos organismos. A pesar del gran avance en el análisis de ADN de los parásitos, no existe un consenso sobre cuáles son los marcadores genéticos que permiten distinguir entre especies y cuáles poseen mayor representación en las bases de datos. Este trabajo analizó las relaciones filogenéticas de organismos de importancia médica y veterinaria de tres familias de nemátodos: Ascarididae, Onchocercidae y Ancylostomatidae, estudiando 30 especies de estas familias en total. Se utilizaron diferentes marcadores moleculares, de ADN nuclear como lo son el 18S y las regiones ITS-1 e ITS-2; y de ADN mitocondrial como el cox1, 12S y 16S. Se realizaron árboles filogenéticos para cada uno de los marcadores con su respectivo heatmap que computaba los resultados de identidad pareada mínima entre las especies de una misma familia. Se observó que los marcadores de origen mitocondrial cox1, 12S y 16S tenían una mejor resolución interespecie y robustez comparados con los marcadores de ADN nuclear. Por lo tanto, estos genes tienen potencial en aplicaciones como el barcoding. Además, se realizó una cuantificación de las secuencias disponibles en la base de datos del NCBI de las especies analizadas en este estudio para los diferentes marcadores moleculares utilizados, siendo el cox1 el marcador con mayor cantidad de secuencias depositadas.Ítem Estudio de la correlación entre 53BP1 y la fosforilación de H2A.X para la determinación de la cinética del daño o reparación del ADN en células de cáncer de mama HS 578T expuestas a agentes genotóxicos(2023) Mora Cascante, Pamela; Quirós Barrantes, SteveLos agentes genotóxicos utilizados para el tratamiento del cáncer pueden producir estrés replicativo que conlleva a rupturas en la doble cadena del ADN; como respuesta a estos daños se activa una vía de señalización marcada por la fosforilación de la histona 2A.X (H2A.X) en la posición S139. Esta forma fosforilada de H2A.X (conocida como γH2A.X o pS139H2A.X), se acumula en el sitio del daño y es considerada un biomarcador de daño y reparación del ADN, al igual que otras proteínas que son reclutadas como 53BP1. γH2A.X puede ser detectada y cuantificada por medio de técnicas de inmunomarcaje utilizando microscopía de fluorescencia, pero esto requiere fijación y permeabilización de las células. Se propone el uso de un sistema reportero policistrónico en células HS 578T-53BP1 para la detección y cuantificación de 53BP1 posterior al tratamiento con agentes genotóxicos a diferentes dosis y tiempos post tratamiento para determinar si existe correlación con la determinación por inmunomarcaje de γH2A.X usando microscopía de fluorescencia. Se determina que existe correlación alta entre las proteínas γH2A.X y 53BP1 en células HS 578T, siendo esta más marcada a 24 horas posteriores al tratamiento con agentes genotóxicos.