Implementación de la técnica de reacción en cadena de la polimerasa (PCR) para el diagnóstico de brucelosis bovina en Costa Rica
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2002
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Resumen
Se propone la estandarización de una técnica de Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR) para el diagnóstico de burcelosis bovina en Costa Rica El diagnóstico molécular está dirigido hacia la amplificación y detección de una secuencia de insersion denominada IS6501 específica del género Brucella. La especificidad del método fue evaluada utilizando bacterias relacionadas y no realcionadas filogenéticamente con el género Brucella. La sensibilidad se determinó por medio de la detección de ADN purificado de B. ahortus 2308 en plasma y por medio de la detección de B. abortus 2308 en leche, suero humano y sangre total bovina. Además, se evaluó la aplicabilidad in vivo de la metodología inoculando roedores con B. abortus 2308. Se ensayó entonces la detección del ADN de Hrucella en muestras de sangre y de bazo extraidas de los animales. El método se muestra promisorio para el diagnostico de bnicelosis ya que con respecto a la especificidad de la prueba, no se detectaron reacciones cruzadas con ninguno de los siguientes microorganismos: Ochrohactrum anthropi 3301 , Agrobacterium tumefaciens 547, Vibrio cholerae, Salmonella sp, Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Lis teria monocytogenes, Alcaligenes xilosoxidans, Yersinia enterocolítica, y Streptococcus pyogenes. Las primeras dos especies se encuentran relacionadas filogenéticamente con el género Brucella. Con respecto al sensibilidad fue posible detectar hasta 74 pg de ADN Brucella purificado en muestras de suero humano. Sangre bovina total, leche y suero humano el límite de detección del método se estableció en 1x104 UFCIml para sangre y suero y en 1x108UFC/ml en leche. Durante la valoración in vivo de la aplicabilidad de la técnica el patógeno pudo ser detectado a nivel de bazo, pero no en sangre periférica.
Descripción
Tesis (licenciatura en microbiología y química clínica)--Universidad de Costa Rica. Facultad de Microbiología, 2002.
Palabras clave
GANADO BOVINO - ENFERMEDADES, BRUCELOSIS, EXPERIMENTACION ANIMAL, BRUCELLA ABORTUS, POLIMEROS - APLICACIONES CIENTIFICAS