Examinando por Autor "Morales Montero, Fernando Alberto"
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Ítem Análisis de la dinámica mutacional del gen DMPK y posibles modificadores genéticos en dos tejidos de pacientes con DM1(2013) Corrales Acuña, Eyleen Vanessa; Morales Montero, Fernando AlbertoLa DMl o enfermedad de Steinert es la miopatía hereditaria más frecuente en adultos. Se origina por la expansión de la repetición (CTG)n ubicada en la región 3' no traducida (3'-UTR) del gen DMPK. La enfermedad se desarrolla cuando se exceden las 50 unidades repetitivas y su manifestación depende en gran medida del tamaño de mutación heredado e inestabilidad que presente el alelo. Por ello se ha procurado desarrollar estrategias de análisis moleculares que permitan brindar información pronóstica certera a los pacientes. La presente investigación se desarrolló con el fin de describir y comparar la dinámica mutacional del gen DMPK en dos tejidos y analizar posibles modificadores. Para ello se analizaron muestras de sangre periférica y epitelio bucal colectadas en el mismo momento de 30 pacientes afectados con diferentes formas clínicas de DMl. El tamaño del alelo progenitor (PAL) y grado de variación somática (SV) se determinó a través de la técnica de la small pool- PCR (SP-PCR) y mediante pirosecuenciación se determinó el estado de metilación en dos sitios de unión del elemento aislador CTCF aledaños a las repeticiones CTG. La comparación de las estimativas de PAL y SV brindaron indicios de la existencia de dinámicas mutacionales distintas en sangre y epitelio bucal, recalcando la importancia de evaluar la idoneidad de los tejidos utilizados para efectuar los análisis moleculares. La estimación del PAL en epitelio bucal mediante SP-PCR permitió obtener una predicción considerablemente buena de la edad de inicio de la enfermedad, lo que sugiere que este tejido podría ser un candidato adecuado para la realización de análisis moleculares de la enfermedad, tanto con fines diagnóstico como pronóstico. No se logró mostrar que el estado de metilación en los sitios de unión de CTCF estuviera relacionado con las diferencias en la dinámica mutacional encontradas...Ítem Búsqueda de modificadores genéticos en una enfermedad causada por mutaciones inestables: distrofia miotónica tipo 1(2009) Guillén Zúñiga, Adriana María; Morales Montero, Fernando AlbertoLa participación del sistema de reparación de apareamientos erróneos (MMR) en la inestabfüdad microsatelítica (MSI), ha generado interés en el análisis de su contribución en la inestabilidad de trinucleótidos repetidos en enfermedades neurodegenerativas, como la distrofia miotónica tipo I (DM1) y enfermedad de Huntington (HD). La implicación del sistema MMR en enfermedades causadas por expansiones de nucleótidos, ha sido estudiada ampliamente en modelos de ratones transgénicos de HD y DM1, donde hay datos que involucran a genes de este sistema con el mecanismo de expansión y se ha especulado que en humanos los polimorfismos en esos genes, son excelentes candidatos genéticos trans-modificadores tanto de la inestabilidad somática como germinal. En este sentido, esta práctica dirigida se enfocó en la búsqueda de modificadores genéticos que pudieran estar involucrados en el mecanismo de expansión de tripletas inestables. Este análisis constituye el primer estudio que se realiza en el país para analizar si existe asociación entre polimorfismos en los genes de reparación y la variación residual de la edad de inicio de la enfermedad y la variación residual de la variación somática en los pacientes afectados por DM1. Con ese propósito, se analizaron tres polimorfismos de dos genes del sistema MMR : el rsl805321 :C>T y el rs2228006 :A>G en el gen PMS2 y el rs1382543:G>A en el gen MSH3 en muestras de 148 pacientes con DMl originarios de Costa Rica, Texas, Escocia y Uruguay. Se calcularon las frecuencias alélicas de cada polimorfismo, las cuales resultaron ser muy similares a las reportadas para la población mundial. Los análisis de los datos revelaron que la variante rs2228006 :A>G no está en equilibrio Hardy- Weinberg (HWE) para la muestra de Costa Rica, Texas y Escocia. Se realizaron análisis de regresión lineal para la obtención de los residuos de la variación somática y su posterior asociación con los SNPs...Ítem Diagnóstico molecular de la distrofia miotónica en Costa Rica(2000) Morales Montero, Fernando Alberto; Cuenca Berger, PatriciaLa Distrofia Miotónica (DM) es una enfermedad neuromuscular degenerativa, progresiva y multisistémica. Su incidencia varía en distintas poblaciones. Presenta un patrón de herencia autosómico dominante con expresión variable y penetrancia incompleta. Representa uno de los mejores ejemplos del fenómeno de anticipación genética. El defecto génico consiste en una expansión del trinucleótido repetido (CTG) en tandem en la región 3' no codificante (3' UTR) del gen DMPK localizado en el cromosoma 19ql3 .3. La población nonnal presenta alelos entre 5 a 37 repeticiones de la tripleta CTG y los afectados tienen desde 50 hasta más de 1000. El mecanismo molecular exacto por el cual ocurre la expansión aún es desconocido, al igual que el mecanismo fisiopatológico. Se ha encontrado una correlación inversa entre la edad a la cual se empiezan a presentar los primeros síntomas de la enfermedad y la longitud de la repetición; y una correlación positiva con la severidad de la enfermedad. Ciertas propiedades de la región repetida CTG en el gen DMPK, tales como la inestabilidad mitótica y meiótica, logran explicar los patrones inusuales de la herencia y las variaciones en las manifestaciones clínicas de la DM. Existe varías hipótesis que tratan de explicar el mecanismo fisiopatológico de la DM, las cuales incluyen: la ganancia de función del ARN, el efecto negativo que la amplificación causa sobre la expresión de otros genes y por último factores intrínsecos de cada persona afectada. El objetivo del estudio consiste en implementar el diagnóstico molecular de la DM en Costa Rica con el fin de poder brindar un mejor manejo clínico de los pacientes afectados y un consejo genético mas certero y preciso. Para esto, el estudio se basó en aquellos casos con diagnóstico clínico de DM y sus familiares, a los cuales se les confirmó el diagnóstico mediante el uso de técnicas moleculares...Ítem Establecimiento y caracterización de un modelo de células neuronales en la distrofia miotónica tipo 1(2018) Vaglio Garro, Annette Diane; Morales Montero, Fernando AlbertoLa Distrofia Miotónica tipo 1 (DM 1) es una enfermedad de herencia autosómica dominante, causada por una expansión inestable del trinucleótido CTG repetido que se localiza en la región 3·UTR del gen que codifica para la proteína quinasa DM 1 (DMPK). La DM 1 es la forma más común de distrofia muscular en adultos. Inicialmente fue considerada como una enfermedad muscular, pero hoy en día se sabe que la DMl es una enfermedad multisistémica que afecta diferentes órganos y tejidos, incluyendo el sistema nervioso central (SNC); por ejemplo la forma congénita de la enfermedad muestra discapacidad intelectual severa. El número de repeticiones de la tripleta CTG tiende a aumentar cuando se transmite de manera vertical de una generación a la siguiente, ocasionando un aumento en la severidad de la enfermedad y disminución en la edad de inicio en generaciones sucesivas en la misma familia con DM 1. Adicionalmente, la repetición es inestable en tejidos somáticos, es decir, la región sigue expandiéndose a lo largo de la vida del paciente. Algunos síntomas característicos de Ja DM 1 han sido explicados por la acumulación nuclear del ARN que contiene Ja expansión CTG, el cual se vuelve tóxico al ocasionar una desregulación de proteínas de unión al ARN que participan en el procesamiento alternativo del ARN, Jo que lleva a errores en el corte y empalme de pre-ARNm de múltiples genes en los tejidos con DM J, incluyendo el cerebro. Sin embargo la vía metabólica que explica cómo se desencadena Ja disfunción neuropsicológica en DM 1 sigue siendo poco conocida. Para analizar el efecto de Ja mutación en tejido cerebral, se hizo uso de un modelo celular neuronal inducible (SH-SY5Y). El modelo contiene un constructo con 800 repeticiones CTG, el cual es inducido en forma específica por tetraciclina ( doxiciclina). Con el fin de trabajar con un modelo celular maduro, las células fueron diferenciadas a neuronas usando 50μM de ácido...Ítem Identificación de variantes genéticas en los genes CLCN1 y SCN4A en personas con miotonías hereditarias no distróficas(2017) Roig Fernández, Jeffry; Morales Montero, Fernando Alberto