Chacón Díaz, CarlosNavarro Álvarez, Natasha2024-12-202024-12-202023https://repositorio.sibdi.ucr.ac.cr/handle/123456789/23726Tesis (licenciatura en microbiología y química clínica)--Universidad de Costa Rica. Facultad de Microbiología, 2023Brucella canis, es una bacteria Gram negativa intracelular facultativa, que causa un cuadro clínico conocido como brucelosis canina. Es una enfermedad principalmente reproductiva en perros y constituye una zoonosis que genera problemas de salud pública. Actualmente no existen vacunas para tratar la enfermedad, por lo que se trabaja en la búsqueda de candidatos vacunales. Se ha propuesto que la mutación de genes que codifican por proteínas de membrana podría disminuir la virulencia de B. canis. El gen Bab1_1346 codifica por una proteína que le confiere a la bacteria la capacidad de sobrevivir a un bajo pH, propio del microambiente en que se desarrolla. El gen Bab2_0655 codifica por una proteína que contribuye a la resistencia de la membrana a péptidos catiónicos antimicrobianos (CAMPs). En esta investigación se determinó el efecto de mutaciones inducidas en estos genes sobre la virulencia de B. canis, mediante la construcción y validación del mutante Bc ΔBab2_0655. En el mutante Bc ΔBab2_0655 se evaluó: la viabilidad elaborando cinéticas de crecimiento bajo diferentes condiciones, la resistencia a péptidos catiónicos, el efecto lítico del suero, la infección en macrófagos RAW 264.7 y el perfil de citoquinas producto de la interacción. En estos ensayos se obtuvo que el sistema Bc ΔBab2_0655 en estudio no presentó una atenuación adecuada que cumpla con las características que requiere un candidato vacunal. En el caso del gen Bab1_1346, no se logró obtener un mutante viable, por lo que se teoriza que puede ser un gen esencial o que metodológicamente se necesita hacer algún ajuste para generar el mutante.Inglés: Brucella canis is a Gram negative, intracellular, extracellular facultative bacteria that causes a pathology known as canine brucellosis; this is a sexually transmitted disease in dogs and it constitutes a zoonosis and a public health issue. There is not a vaccine against canine brucellosis and new vaccinal candidates need to be develop. It’s been proposed that the vii knockout of genes that encode for membrane proteins could diminish the virulence of B. canis. Bab1_1346 is a gene that encodes for a protein that confers low-pH survival capabilities to the bacteria, as it develops in an acid microenvironment. Bab2_0655 is a gene that encodes for a CAMP-resistant membrane protein. In this research, we assessed the effect of induced mutations on these genes, and their influence on B. canis’s virulence constructing and validating the mutant Bc ∆Bab2_0655. In vitro viability was assessed by quantification; through the construction of a growth curve, and infection of HeLa cells and RAW 264.7 macrophages and the cytokine profile product of the interaction. In these assays, it was found that the Bc ∆Bab2_0655 system in study does not exhibit the adequate attenuation that meets the requirements for a vaccine candidate. In the case of Bab1_1346, a viable mutant could not be obtained, leading to the theory that it may be an essential gene or that some methodological adjustments need to be done in order to generate the mutant.spaBACTERIAS GRAMNEGATIVASBRUCELLA CANISBRUCELOSIS - MICROBIOLOGIAFILOGENIAGENETICA MOLECULARMUTAGENESISTECNICAS IN VITROproyecto fin de carrera